apoH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419168

Descripción general

Apoh codifica la apolipoproteína H (apoH; β2-glicoproteína I), una glicoproteína circulante que se une a fosfolípidos y se asocia con membranas aniónicas y con partículas de lipoproteínas. En ratones, la apoH participa en procesos de transporte y depuración de lípidos y se relaciona con vías vinculadas a la coagulación y al complemento a través de sus interacciones con fosfolípidos con carga negativa expuestos durante la activación o el daño celular. Las alteraciones en la biología de APOH/apoH se asocian con una hemostasia desregulada y con procesos vasculares inflamatorios, y con frecuencia se estudia en el contexto del reconocimiento de fosfolípidos mediado por autoanticuerpos. Estas funciones hacen de Apoh una diana útil para investigar la comunicación cruzada lípido–inmunidad, la biología de proteínas con unión a membrana y los mecanismos que conectan la inflamación con fenotipos relacionados con la trombosis en modelos experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO apoH (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Apoh en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Apoh junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Apoh tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína apoH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Apoh para la investigación de la señalización de apoH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Apoh críticos para la función de apoH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Apoh para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido apoH CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido apoH CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Apoh. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR apoH (m) y el plásmido HDR apoH (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Apoh para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Apoh definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.