apoH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419168

概要

Apoh は、アポリポタンパク質H（apoH；β2-グリコプロテインI）をコードしており、循環血中に存在するリン脂質結合性の糖タンパク質で、陰性荷電膜やリポタンパク粒子と会合します。マウスでは、apoH は脂質の輸送およびクリアランス過程に関与し、細胞の活性化や損傷時に露出する陰性荷電リン脂質との相互作用を介して、凝固関連経路や補体系関連経路とも連携します。APOH/apoH の生物学的特性の変化は、止血の制御不全や炎症性の血管プロセスと関連しており、自己抗体によるリン脂質認識という文脈でしばしば研究されています。これらの機能により、Apoh は脂質—免疫クロストーク、膜結合タンパク質の生物学、ならびに炎症が血栓関連表現型へと結び付く機序を実験モデルで解明するための有用な標的となります。

apoH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるApoh遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Apoh内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Apohのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、apoHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、apoHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Apoh欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• apoHの機能に不可欠なApohエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Apohゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• apoH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびapoH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Apoh遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  apoH HDRプラスミド（m）および apoH HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはApohホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のApoh標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。