Plasmide CRISPR d'Activation (h) apoA-IV: sc-402217-ACT

L’APOA4 humain code l’apolipoprotéine A‑IV (apoA‑IV), une apolipoprotéine sécrétée principalement synthétisée par les entérocytes intestinaux et associée aux chylomicrons et aux HDL dans la circulation. L’apoA‑IV contribue à l’absorption des lipides et au métabolisme postprandial des lipoprotéines, en favorisant l’efflux de cholestérol et en modulant des enzymes impliquées dans le remodelage des lipoprotéines au sein des voies de transport inverse du cholestérol. Par ses rôles dans la gestion intestinale des lipides et l’homéostasie lipidique systémique, APOA4 est étudié dans le contexte de la dyslipidémie, de la biologie liée à l’athérosclérose et des mécanismes des maladies métaboliques. La dynamique de son expression en fait également un marqueur utile des programmes transcriptionnels sensibles aux nutriments dans des systèmes modèles gastro-intestinaux et hépatiques.

apoA-IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apoA-IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apoA-IV. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apoA-IV au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apoA-IV dans les cellules tumorales présentant une expression de APOA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.