APNG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435240

Descripción general

El gen Mpg de ratón codifica la N‑glucosilasa de ADN de alquilpurinas (APNG), una enzima de reparación por escisión de bases (BER) que reconoce y elimina una variedad de lesiones de purinas alquiladas y desaminadas, incluidas la 3‑metiladenina y la hipoxantina. Al iniciar la eliminación de bases dañadas, APNG ayuda a mantener la fidelidad de la replicación y limita la mutagénesis derivada del metabolismo endógeno y de genotóxicos ambientales. La actividad de APNG se integra con factores centrales de la BER como APEX1, POLβ y XRCC1 para completar el procesamiento de la lesión y la restauración de la hebra. Las alteraciones en la función de MPG/APNG se han vinculado a fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la investigación de la carcinogénesis y a la sensibilidad al estrés por alquilación del ADN en modelos celulares y de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO APNG (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mpg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mpg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mpg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína APNG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mpg para la investigación de la señalización de APNG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mpg críticos para la función de APNG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mpg para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido APNG CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido APNG CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mpg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR APNG (m) y el plásmido HDR APNG (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mpg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mpg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.