Plásmido Doble Nickase (h) APC: sc-400374-NIC

APC codifica la proteína *adenomatous polyposis coli*, un supresor tumoral multifuncional que actúa como andamiaje del complejo de destrucción de β-catenina y, de este modo, regula la señalización Wnt canónica y los programas transcripcionales que controlan la proliferación y la diferenciación. Más allá del control de la vía Wnt, APC coordina la dinámica del citoesqueleto, la polaridad celular y la segregación cromosómica mediante interacciones con microtúbulos, factores asociados a actina y componentes del cinetocoro. La alteración de la función de APC se asocia estrechamente con la estabilización aberrante de β-catenina, cambios en las decisiones de destino celular e inestabilidad genómica, lo que convierte a APC en un nodo central para estudiar la homeostasis del epitelio intestinal y los mecanismos de señalización oncogénica. Por ello, el APC humano se utiliza ampliamente para investigar la reconfiguración de vías en modelos de cáncer colorrectal y fenotipos relacionados impulsados por Wnt.

APC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.