ANO4 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-406887-LAC-2

ヒトのANO4は、カルシウム制御下のイオン輸送および細胞膜におけるリン脂質スクランブリングに関与するとされる、多回膜貫通型膜タンパク質であるTMEM16／アノクタミンファミリーの一員、アノクタミン4をコードしている。ANO4の活性は、膜電位の調節、細胞内Ca²⁺依存性シグナル伝達、ならびに小胞輸送、アポトーシス、細胞興奮性に影響するリモデリング過程の制御と関連づけられている。ANO4を含むTMEM16ファミリータンパク質の発現変動や機能不全は、神経学的表現型をはじめとする複雑な表現型との関連が報告されており、神経変性や組織恒常性の機構解明に向けた研究対象としての重要性が支持される。ANO4の遺伝子編集や機能撹乱を用いた研究により、電気生理学的解析や脂質スクランブリングアッセイなどを含むモデル系で経路の切り分けが可能となり、下流シグナルネットワークおよび遺伝子型―表現型関係のマッピングに役立つ。

ANO4 レンチウイルス活性化粒子（h2）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なANO4の発現上昇を可能にします。

ANO4 レンチウイルス活性化粒子（h2）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、ANO4転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性ANO4の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のANO4ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。