ANO1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-401314-KO-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ANO1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ANO1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ANO1 Anticuerpo (C-5): sc-377115
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ANO1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2) | sc-401314-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ANO1 (TMEM16A) codifica un canal de cloruro activado por Ca2+ que regula el transporte epitelial de iones y fluidos, la excitabilidad del músculo liso y la transducción de señales sensoriales. La actividad del canal acopla las señales intracelulares de Ca2+ con la despolarización de la membrana y el flujo de cloruro, modulando procesos como la secreción en las vías respiratorias y el tracto gastrointestinal, así como la modulación del disparo neuronal. ANO1 participa en redes de señalización aguas abajo de la activación de la fosfolipasa C inducida por receptores y de la liberación de Ca2+, e influye en la motilidad celular y la dinámica de membrana en múltiples contextos tisulares. La expresión o actividad desregulada de ANO1 se ha asociado con fenotipos de excitabilidad y secreción alterados, y se ha estudiado con frecuencia en oncología y en contextos inflamatorios como un factor que contribuye a programas aberrantes de proliferación y migración celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ANO1 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ANO1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ANO1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ANO1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ANO1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ANO1 para la investigación de la señalización de ANO1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ANO1 críticos para la función de ANO1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ANO1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ANO1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ANO1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ANO1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ANO1 (h) y el plásmido HDR ANO1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ANO1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ANO1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.