ANO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-401314-KO-2

概要

ANO1（TMEM16A）は、Ca2+活性化クロライドチャネルをコードしており、上皮におけるイオン・水輸送、平滑筋の興奮性、ならびに感覚シグナル伝達を調節します。このチャネル活性は、細胞内Ca2+シグナルを膜の脱分極および塩化物イオンのフラックスに結び付け、気道や消化管の分泌、神経発火の調節などの過程を形成します。ANO1は、受容体依存的なホスホリパーゼCの活性化とCa2+放出の下流にあるシグナル伝達ネットワークに関与し、さまざまな組織環境において細胞運動性や膜ダイナミクスにも影響を与えます。ANO1の発現や活性の異常は、興奮性や分泌に関わる表現型の変化と関連しており、がんや炎症の文脈で、異常な細胞増殖・遊走プログラムに寄与する因子として頻繁に研究されています。

ANO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるANO1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ANO1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ANO1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ANO1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ANO1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ANO1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ANO1の機能に不可欠なANO1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ANO1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ANO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびANO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ANO1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ANO1 HDRプラスミド（h）および ANO1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはANO1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のANO1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。