Annexin VI Plasmide Double Nickase (h): sc-401791-NIC

ANXA6 umano codifica l'annessina VI, una proteina "scaffold" che lega fosfolipidi in modo Ca2+-dipendente e si associa al foglietto interno delle membrane cellulari per coordinare il traffico di membrana, l'esocitosi/endocitosi e la dinamica del citoscheletro. L'annessina VI partecipa alla segnalazione del calcio e all'organizzazione dei microdomini di membrana, influenzando il turnover dei recettori e le vie di trasduzione del segnale che dipendono da un trasporto vescicolare regolato. È stata collegata a processi quali l'omeostasi del colesterolo e la migrazione cellulare attraverso i suoi ruoli nello smistamento endosomiale e nell'accoppiamento membrana–citoscheletro. Alterazioni dell'espressione o della localizzazione di ANXA6 sono state riportate in diversi contesti, inclusi la biologia del cancro e fenotipi cellulari correlati al sistema cardiovascolare, rendendola rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione dipendenti dalla membrana.

Annexin VI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANXA6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANXA6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANXA6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANXA6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.