Annexin V Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400836-ACT

O gene humano ANXA5 codifica a anexina V, uma proteína de ligação a fosfolipídios dependente de Ca2+ que se associa preferencialmente à fosfatidilserina nas membranas celulares e reorganiza microdomínios de membrana. A anexina V participa do tráfego de membranas, da sinalização dependente de fosfolipídios e da regulação de superfícies relacionadas à coagulação, sendo amplamente utilizada como um marcador molecular da externalização de fosfatidilserina durante a apoptose. Por meio de suas funções na dinâmica de membrana regulada por cálcio, a anexina V está ligada a processos que incluem fusão de vesículas, respostas ao estresse celular e sinalização inflamatória. A desregulação da expressão ou da localização de ANXA5 tem sido investigada em contextos como a biologia da trombose, fenótipos autoimunes e programas de sobrevivência de células tumorais, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em vias associadas à membrana.

Annexin V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANXA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Annexin V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANXA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANXA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Annexin V. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANXA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Annexin V no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Annexin V em células tumorais com expressão de ANXA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.