Alox12e CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419087

Übersicht

Alox12e kodiert die Arachidonat-12-Lipoxygenase vom Typ 12R, eine nicht-hämhaltige Eisen-Dioxygenase, die die Oxygenierung mehrfach ungesättigter Fettsäuren katalysiert und dabei bioaktive Lipidmediatoren erzeugt. In der Maus-Epidermis wirkt Alox12e innerhalb des Lipoxygenasewegs und kooperiert mit verwandten Enzymen bei der oxidativen Lipidverarbeitung, die die Differenzierung von Keratinozyten und die Ausbildung der Barriere des Stratum corneum unterstützt. Durch die Regulation von Lipidoxidationsprodukten und nachgeschalteter Signalwege trägt Alox12e zur Barrierehomöostase, zu entzündlichen Reaktionen und zur Stresssignalgebung in der Haut bei. Störungen dieser Achse sind relevant für Studien zu ichthyoseähnlichen Barrieredefekten, dermatitisassoziierter Entzündung und allgemeineren Phänotypen des Lipidstoffwechsels in der Epithelbiologie.

Das Alox12e CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Alox12e-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Alox12e-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Alox12e nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Alox12e-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Alox12e-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Alox12e-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Alox12e-Exone abzielen, die für die Alox12e-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Alox12e-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Alox12e CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Alox12e CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Alox12e-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Alox12e HDR-Plasmid (m) und Alox12e HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Alox12e-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Alox12e-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.