Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m): sc-431814

Présentation

Le gène murin **Aldh4a1** code l’aldéhyde déshydrogénase 4-A1 (P5CDH/ALDH4A1), une enzyme mitochondriale qui catalyse la conversion du Δ1-pyrroline-5-carboxylate en glutamate lors des étapes terminales du catabolisme de la proline et de l’hydroxyproline. En contrôlant le flux entre le métabolisme de la proline, la production de glutamate et l’équilibre rédox mitochondrial, ALDH4A1 influence l’homéostasie des acides aminés et la détoxification des aldéhydes réactifs. La perturbation de cette voie est associée à une altération de la gestion du stress oxydant et à un dysfonctionnement mitochondrial, faisant d’**Aldh4a1** un nœud pertinent pour étudier les réponses au stress métabolique. L’activité d’ALDH4A1 est également reliée à des processus plus larges de détection des nutriments et d’anaplérose via l’entrée, dépendante du glutamate, dans le cycle de l’acide citrique (cycle de Krebs).

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aldh4a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aldh4a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aldh4a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aldh4a1 pour l'étude de la signalisation de Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aldh4a1 essentiels à la fonction de Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aldh4a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aldh4a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 plasmide HDR (m) et le Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aldh4a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aldh4a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.