Plasmide CRISPR/Cas9 KO Akp-5 (m): sc-419070

Présentation

Alppl2 code l’isoforme de phosphatase alcaline murine Akp-5, une ectoenzyme ancrée à la glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui déphosphoryle, à la surface cellulaire, des nucléotides extracellulaires et d’autres phosphomonoesters. En régulant la disponibilité locale en phosphate et les intermédiaires de la signalisation purinergique, Akp-5 peut influencer des processus métaboliques associés à la membrane, des programmes de différenciation épithéliale et des signaux du microenvironnement qui modulent les interactions cellule–cellule. L’expression d’Alppl2 a été rapportée dans des contextes liés à l’état développemental et à l’identité de lignée, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel dans les études sur la différenciation et le remodelage tissulaire. Une activité de phosphatase alcaline dérégulée est fréquemment étudiée en lien avec des altérations de la maturation cellulaire et des réponses au stress, ce qui étaye l’intérêt d’examiner Alppl2 dans des modèles de contrôle anormal de la croissance et de phénotypes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Akp-5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Alppl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Alppl2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Alppl2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Akp-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Alppl2 pour l'étude de la signalisation de Akp-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Alppl2 essentiels à la fonction de Akp-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Alppl2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Akp-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Akp-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Alppl2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Akp-5 plasmide HDR (m) et le Akp-5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Alppl2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Alppl2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.