AKAP 79 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402647

Übersicht

AKAP5 kodiert AKAP79, ein membranassoziiertes A‑Kinase‑Ankerprotein, das multiproteinäre Signalkomplexe organisiert, indem es PKA zusammen mit Phosphatasen wie Calcineurin und PP2B an definierte subzelluläre Mikrodomänen bindet. Durch das Gerüstbilden von Kinasen, Phosphatasen und Rezeptoren beeinflusst AKAP79 Signalstärke und -dauer in Signalwegen, die synaptische Plastizität, Rezeptortrafficking und aktivitätsabhängige Phosphorylierung steuern, einschließlich calcium- und cAMP‑regulierter Prozesse. In Neuronen und erregbaren Geweben beeinflusst diese räumliche Regulation die Modulation von Ionenkanälen und nachgeschaltete transkriptionelle Antworten. Eine Fehlregulation der AKAP79‑Signalgebung wurde mit veränderter neuronaler Erregbarkeit und Netzwerkfunktion in Verbindung gebracht, wodurch AKAP5 einen geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen darstellt, die für die Biologie neurologischer Erkrankungen und stressresponsive Signalwege relevant sind.

Das AKAP 79 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AKAP5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AKAP5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AKAP5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AKAP 79-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AKAP5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AKAP 79-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AKAP5-Exone abzielen, die für die AKAP 79-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AKAP5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AKAP 79 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AKAP 79 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AKAP5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AKAP 79 HDR-Plasmid (h) und AKAP 79 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AKAP5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AKAP5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.