AKAP 7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406308

Panoramica

AKAP7 (proteina di ancoraggio della A-chinasi 7) è una scaffold della PKA che limita spazialmente la segnalazione dipendente da cAMP ancorando la proteina chinasi A a microdomini subcellulari definiti. Attraverso la compartimentalizzazione della PKA e degli effettori associati, AKAP7 contribuisce a coordinare eventi di fosforilazione che regolano l’attività dei canali ionici, l’eccitabilità di membrana e programmi trascrizionali a valle responsivi al cAMP. Questa segnalazione ancorata contribuisce a un controllo fine delle dinamiche cellulari, come la gestione del calcio e le risposte accoppiate allo stimolo, in tessuti eccitabili e non eccitabili. La disregolazione delle reti di scaffold cAMP/PKA, inclusa l’alterazione della segnalazione dipendente da AKAP7, è rilevante per studi meccanicistici dell’elettrofisiologia cardiaca, della segnalazione neuronale e di patologie più ampie legate a un’errata compartimentalizzazione delle chinasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AKAP7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AKAP7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AKAP7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AKAP 7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AKAP7 per lo studio della segnalazione di AKAP 7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AKAP7 critici per la funzione di AKAP 7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AKAP7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AKAP 7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AKAP 7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AKAP7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AKAP 7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AKAP 7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AKAP7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AKAP7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.