AKAP 7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406308

Übersicht

AKAP7 (A‑Kinase‑Ankerprotein 7) ist ein PKA‑Scaffold, das cAMP‑abhängige Signalübertragung räumlich einschränkt, indem es die Proteinkinase A an definierte subzelluläre Mikrodomainen koppelt. Durch die Kompartimentierung von PKA und assoziierten Effektoren hilft AKAP7, Phosphorylierungsereignisse zu koordinieren, die die Aktivität von Ionenkanälen, die Membran‑Erregbarkeit und nachgeschaltete, cAMP‑responsive Transkriptionsprogramme regulieren. Diese verankerte Signalgebung trägt zur Feinsteuerung zellulärer Dynamiken wie der Calcium‑Handhabung und stimulusgekoppelter Antworten in erregbaren und nicht erregbaren Geweben bei. Eine Fehlregulation von cAMP/PKA‑Scaffolding‑Netzwerken, einschließlich veränderter AKAP7‑abhängiger Signalübertragung, ist für mechanistische Studien zur kardialen Elektrophysiologie, neuronalen Signalgebung und allgemeineren Pathologien relevant, die mit aberranter Kinase‑Kompartimentierung verbunden sind.

Das AKAP 7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AKAP7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AKAP7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AKAP7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AKAP 7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AKAP7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AKAP 7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AKAP7-Exone abzielen, die für die AKAP 7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AKAP7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AKAP 7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AKAP 7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AKAP7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AKAP 7 HDR-Plasmid (h) und AKAP 7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AKAP7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AKAP7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.