AIP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421158

Übersicht

Itch (AIP4) kodiert eine HECT-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die die Ubiquitinierung von Zielproteinen katalysiert, um deren Stabilität und intrazellulären Transport zu steuern, und damit Proteostase und Signaldauer mitprägt. In Mauszellen ist AIP4 an der ubiquitinabhängigen Regulation von Immun-Signalwegen beteiligt, einschließlich der Modulation von NF-κB und verwandten rezeptorproximalen Komplexen, und beeinflusst dadurch Zytokinausgabe und inflammatorische Homöostase. Itch trägt außerdem zur Differenzierung von T-Zellen und zur peripheren Toleranz bei, indem es den Umsatz transkriptioneller Regulatoren und Signaladapter vermittelt. Eine fehlregulierte Itch-Aktivität wurde mit Immunungleichgewichten, inflammatorischen Phänotypen sowie einer veränderten Kontrolle von Zellwachstums- und Überlebenssignalwegen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und neuroimmunologische Wechselwirkungen relevant sind.

Das AIP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Itch-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Itch-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Itch nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AIP4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Itch-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AIP4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Itch-Exone abzielen, die für die AIP4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Itch-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AIP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AIP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Itch-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AIP4 HDR-Plasmid (m) und AIP4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Itch-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Itch-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.