Plasmide CRISPR/Cas9 KO Agrin (m): sc-419044

Présentation

Agrn code pour l’agrine, un grand protéoglycane à héparane sulfate de la matrice extracellulaire qui organise les interactions cellule–matrice et façonne une architecture synaptique spécialisée. Chez la souris, l’agrine est surtout connue pour coordonner la maturation de la jonction neuromusculaire via des réseaux de signalisation qui regroupent les récepteurs de l’acétylcholine et stabilisent la différenciation pré‑ et postsynaptique, tout en influençant la structure de la membrane basale et la connectivité neuronale. Au-delà des synapses, l’agrine contribue à la mécanotransduction et à des voies liées à l’adhésion, qui affectent l’organisation du cytosquelette et l’intégrité tissulaire. Une dérégulation de la biologie de l’agrine a été associée à des phénotypes neuromusculaires et neurodéveloppementaux, ainsi qu’à des modifications du remodelage matriciel pertinentes dans des contextes de dysfonction tissulaire liée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Agrin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agrn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agrn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agrn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Agrin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agrn pour l'étude de la signalisation de Agrin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Agrn essentiels à la fonction de Agrin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agrn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Agrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Agrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agrn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Agrin plasmide HDR (m) et le Agrin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agrn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agrn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.