Plasmide CRISPR/Cas9 KO aggrecan (h): sc-400760

Présentation

ACAN code l’agrécane, un grand protéoglycane à sulfate de chondroïtine qui constitue l’armature hydratée de la matrice extracellulaire du cartilage en se liant à l’hyaluronane et à la protéine de liaison, conférant ainsi une résistance aux charges de compression. Le renouvellement de l’agrécane est coordonné par les programmes anaboliques des chondrocytes et par une protéolyse extracellulaire catabolique, incluant le clivage par les aggrécanases ADAMTS et des voies de remodelage matriciel qui façonnent la biomécanique tissulaire. Une perturbation de l’expression d’ACAN ou du traitement (processing) de l’agrécane dérègle l’homéostasie du cartilage et est impliquée dans des phénotypes squelettiques dégénératifs et développementaux, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de l’organisation de la matrice extracellulaire et de la mécanobiologie. ACAN est donc largement utilisé comme marqueur et déterminant fonctionnel dans les études de différenciation chondrocytaire, de biologie de la plaque de croissance et d’assemblage de la matrice cartilagineuse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO aggrecan (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACAN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACAN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACAN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine aggrecan.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACAN pour l'étude de la signalisation de aggrecan, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACAN essentiels à la fonction de aggrecan
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACAN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le aggrecan plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le aggrecan plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACAN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le aggrecan plasmide HDR (h) et le aggrecan (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACAN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACAN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.