Plasmide CRISPR/Cas9 KO AFG3L2 (h): sc-404565

Présentation

AFG3L2 code une métalloprotéase AAA+ de la membrane interne mitochondriale qui s’assemble en complexe m-AAA, assurant le contrôle qualité des protéines en extrayant et en dégradant les protéines membranaires mal repliées ou non assemblées. Par une protéolyse régulée, AFG3L2 contribue au maintien de l’intégrité de la chaîne respiratoire, à la biogenèse des ribosomes mitochondriaux et à la capacité globale de phosphorylation oxydative, influençant ainsi le métabolisme énergétique cellulaire et la protéostasie. Une altération de la fonction d’AFG3L2 perturbe la dynamique mitochondriale et peut déclencher des réponses au stress liées à une bioénergétique déficiente. Des variants pathogènes d’AFG3L2 sont associés à des phénotypes neurodégénératifs, notamment l’ataxie spinocérébelleuse, ce qui en fait une cible utile pour l’étude du dysfonctionnement mitochondrial dans des modèles neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AFG3L2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AFG3L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AFG3L2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AFG3L2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AFG3L2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AFG3L2 pour l'étude de la signalisation de AFG3L2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AFG3L2 essentiels à la fonction de AFG3L2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AFG3L2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AFG3L2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AFG3L2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AFG3L2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AFG3L2 plasmide HDR (h) et le AFG3L2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AFG3L2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AFG3L2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.