AdSS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419030

Übersicht

Das murine Gen **Adssl1** kodiert **AdSS1**, ein Enzym aus der Adenylosuccinat-Synthase-Familie, das die **de-novo-Purinbiosynthese** unterstützt, indem es die Bildung von **Adenylosuccinat** katalysiert – einen Schlüsselschritt bei der **AMP-Produktion**. Über seinen Beitrag zur Nukleotid-Homöostase trägt AdSS1 zur Aufrechterhaltung der DNA-/RNA-Synthese, der zellulären Energieladung und der Proliferationsfähigkeit bei und ist damit an grundlegende Stoffwechselprogramme gekoppelt, die mitochondriale Funktion und Zellwachstum verbinden. Störungen des Purinstoffwechsels können Replikations- und Stressantwortwege beeinträchtigen und sind häufig mit metabolischer Dysfunktion sowie einer veränderten Zellzykluskontrolle assoziiert. Als muskelangereicherter Paralog innerhalb dieses Signalwegs ist **Adssl1** relevant für die Untersuchung der gewebespezifischen Regulation des Nukleotidflusses und ihrer nachgelagerten Auswirkungen auf Bioenergetik und Zellphysiologie.

Das AdSS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adssl1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adssl1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adssl1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AdSS1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adssl1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AdSS1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adssl1-Exone abzielen, die für die AdSS1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adssl1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AdSS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AdSS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adssl1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AdSS1 HDR-Plasmid (m) und AdSS1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adssl1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adssl1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.