ADK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419008

Descripción general

Mouse Adk codifica la adenosina quinasa (ADK), una enzima citosólica clave que fosforila la adenosina a AMP y ayuda a mantener la homeostasis de la adenosina y las reservas de nucleótidos de adenina. Al regular los niveles de adenosina intra y extracelulares, ADK influye en la señalización purinérgica, el metabolismo energético y el potencial de metilación a través de sus efectos sobre el ciclo S-adenosilmetionina/S-adenosilhomocisteína. La actividad de ADK está vinculada al control de las respuestas celulares al estrés y de la señalización inflamatoria, y la alteración del metabolismo de la adenosina se ha asociado con disfunción neurológica, susceptibilidad a convulsiones y contextos de lesión tisular en modelos experimentales. Como regulador metabólico clave, ADK se estudia con frecuencia en vías que conectan el rescate de nucleótidos, la regulación epigenética y la adaptación inmunometabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adk para la investigación de la señalización de ADK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adk críticos para la función de ADK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ADK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ADK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADK (m) y el plásmido HDR ADK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.