ADHγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402261

Übersicht

ADH1C kodiert die menschliche Gamma‑Untereinheit der Alkoholdehydrogenase (ADHγ), eine zinkabhängige, zytosolische Oxidoreduktase, die die NAD⁺‑abhängige Oxidation von Ethanol sowie anderen kurzkettigen Alkoholen und Aldehyden katalysiert. Diese enzymatische Aktivität unterstützt den Alkohol- und Retinoidstoffwechsel und steht mit der zellulären Redoxhomöostase in Verbindung, indem sie das NADH/NAD⁺‑Gleichgewicht und nachgeschaltete Wege des Aldehydabbaus beeinflusst. Variationen oder Fehlregulationen des mit ADH1C verknüpften Stoffwechselumsatzes können die Acetaldehydbelastung und Reaktionen auf oxidativen Stress modulieren – Prozesse, die mit Leberschädigung, der Metabolisierung von Karzinogenen und breiteren metabolischen Phänotypen in Zusammenhang gebracht werden. Als Teil des ADH‑Genclusters ist ADHγ außerdem relevant für Studien zur gewebespezifischen Entgiftung und Xenobiotika‑Verarbeitung in der Biologie der Leber sowie des oberen Aero‑Digestivtrakts.

Das ADHγ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADH1C-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADH1C-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADH1C nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ADHγ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADH1C-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ADHγ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADH1C-Exone abzielen, die für die ADHγ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADH1C-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ADHγ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ADHγ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADH1C-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ADHγ HDR-Plasmid (h) und ADHγ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADH1C-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADH1C-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.