adenosine deaminase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402201

Übersicht

Das menschliche ADA-Gen kodiert die Adenosin-Deaminase, ein zytosolisches Enzym, das die Desaminierung von Adenosin und Desoxyadenosin zu Inosin-Derivaten katalysiert und dadurch die Purin-Homöostase aufrechterhält sowie intrazelluläre Pools von Desoxyadenosin-Nukleotiden reguliert. Durch die Kontrolle der Spiegel des immunmodulatorischen Adenosins und potenziell zytotoxischer Desoxyadenosin-Metabolite beeinflusst ADA die Entwicklung und Proliferation von Lymphozyten sowie Signalnetzwerke, die mit zellulärem Stress und metabolischer Kontrolle verknüpft sind. Die ADA-Aktivität greift in Purin-Salvage- und katabole Stoffwechselwege ein und formt so das Nukleotidgleichgewicht, die Kapazität zur DNA-Synthese sowie die adenosinrezeptorvermittelte Signalübertragung in immunologischen und nicht-immunologischen Geweben. Genetische Störungen von ADA sind mit schweren Immundefizienz-Phänotypen assoziiert und wurden breit genutzt, um den purinergen Stoffwechsel, die Vitalität von Immunzellen und die metabolitgetriebene Regulation der Genexpression zu untersuchen.

Das adenosine deaminase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die adenosine deaminase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der adenosine deaminase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADA-Exone abzielen, die für die adenosine deaminase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom adenosine deaminase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom adenosine deaminase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das adenosine deaminase HDR-Plasmid (h) und adenosine deaminase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.