adenosine deaminase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402201

Descripción general

La ADA humana codifica la adenosina desaminasa, una enzima citosólica que cataliza la desaminación de la adenosina y la desoxiadenosina a derivados de inosina, manteniendo la homeostasis de las purinas y regulando los reservorios intracelulares de nucleótidos de desoxiadenosina. Al controlar los niveles de adenosina inmunomoduladora y de metabolitos de desoxiadenosina potencialmente citotóxicos, la ADA influye en el desarrollo, la proliferación y las redes de señalización de los linfocitos vinculadas al estrés celular y al control metabólico. La actividad de la ADA se interrelaciona con las vías de rescate y catabolismo de purinas, moldeando el equilibrio de nucleótidos, la capacidad de síntesis de ADN y la señalización mediada por receptores de adenosina en tejidos inmunes y no inmunes. La alteración genética de la ADA se asocia con fenotipos de inmunodeficiencia grave y se ha utilizado ampliamente para estudiar el metabolismo purinérgico, la viabilidad de las células inmunitarias y la regulación de la expresión génica impulsada por metabolitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO adenosine deaminase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ADA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ADA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ADA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína adenosine deaminase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ADA para la investigación de la señalización de adenosine deaminase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ADA críticos para la función de adenosine deaminase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ADA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido adenosine deaminase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido adenosine deaminase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ADA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR adenosine deaminase (h) y el plásmido HDR adenosine deaminase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ADA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ADA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.