ADAM12 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418983

Descripción general

ADAM12 (una desintegrina y metaloproteinasa 12) es una proteasa anclada a la membrana y regulador de la adhesión que modula la remodelación de la matriz extracelular, la señalización de factores de crecimiento y las interacciones célula–célula. En tejidos de ratón, ADAM12 contribuye al “shedding” (desprendimiento proteolítico) de proteínas de la superficie celular e influye en vías vinculadas a la miogénesis, la fibrosis y la remodelación del estroma, incluidos procesos asociados a EGFR y TGF-β. Su actividad afecta la migración celular, la diferenciación y la mecanotransducción al alterar la composición de la MEC y la disponibilidad de receptores. La expresión o actividad desregulada de ADAM12 se ha asociado con la remodelación tisular patológica y fenotipos relacionados con la inflamación, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos de enfermedad en contextos musculoesqueléticos y fibróticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADAM12 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adam12 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adam12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adam12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADAM12.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adam12 para la investigación de la señalización de ADAM12, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adam12 críticos para la función de ADAM12
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adam12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ADAM12 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ADAM12 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adam12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADAM12 (m) y el plásmido HDR ADAM12 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adam12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adam12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.