Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-IIA (m): sc-418976

Présentation

Acvr2a code le récepteur de l’activine A de type IIA (ACTR‑IIA), un récepteur transmembranaire à activité kinase sérine/thréonine qui se lie aux activines et à des ligands apparentés de la superfamille du TGF‑β afin de réguler une transcription dépendante de SMAD2/3. Dans les cellules murines, la signalisation via ACTR‑IIA influence le patterning embryonnaire, la régulation de l’axe reproducteur et l’homéostasie tissulaire en coordonnant des programmes de différenciation, de prolifération et de matrice extracellulaire. Cette voie s’interface avec d’autres récepteurs et modulateurs de la famille TGF‑β pour ajuster des réponses spécifiques au contexte lors du développement et du remodelage. Une dérégulation de la signalisation activine/ACTR‑IIA a été impliquée dans le remodelage fibrotique, des modifications tissulaires associées à l’inflammation et une altération du contrôle de la croissance, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques de phénotypes liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-IIA (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acvr2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acvr2a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acvr2a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTR-IIA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acvr2a pour l'étude de la signalisation de ACTR-IIA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acvr2a essentiels à la fonction de ACTR-IIA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acvr2a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTR-IIA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTR-IIA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acvr2a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTR-IIA plasmide HDR (m) et le ACTR-IIA (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acvr2a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acvr2a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.