Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTG1 (h): sc-400006

Présentation

ACTG1 code l’actine γ cytoplasmique, une isoforme d’actine hautement conservée qui se polymérise en microfilaments afin de soutenir la forme cellulaire, la tension corticale et la stabilité mécanique. La dynamique de l’actine pilotée par ACTG1 coordonne des processus clés, notamment la migration cellulaire, la cytokinèse, le trafic membranaire et la formation des jonctions d’adhérence, en s’intégrant à des voies de régulation de l’actine telles que la signalisation des GTPases de la famille Rho et les réseaux de protéines liant l’actine. En biologie humaine, des altérations de la fonction d’ACTG1 et de l’homéostasie du cytosquelette d’actine sont associées à des anomalies des systèmes sensoriels et du développement, et sont fréquemment étudiées dans le contexte du remodelage du cytosquelette lors des réponses au stress et de la morphogenèse tissulaire. Comme l’architecture de l’actine influence les programmes transcriptionnels et la mécanotransduction, ACTG1 est également pertinent pour l’étude des transitions d’état cellulaire et de la signalisation dépendante du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACTG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACTG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACTG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACTG1 pour l'étude de la signalisation de ACTG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACTG1 essentiels à la fonction de ACTG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACTG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ACTG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACTG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTG1 plasmide HDR (h) et le ACTG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACTG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACTG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.