AChE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401091

Descripción general

El gen humano **ACHE** codifica la acetilcolinesterasa (AChE), una hidrolasa de serina que finaliza la neurotransmisión colinérgica al hidrolizar rápidamente la acetilcolina en sinapsis y uniones neuromusculares. Más allá de la señalización sináptica canónica, la actividad de AChE influye en el acoplamiento excitación–contracción, la regulación autonómica y la señalización colinérgica antiinflamatoria mediante la modulación de la disponibilidad de acetilcolina. La expresión de **ACHE** y la desregulación de su actividad enzimática se han vinculado con alteraciones de la función de las redes neuronales, vías asociadas al estrés y a la neuroinflamación, y una mayor susceptibilidad a fenotipos neuromusculares y neurodegenerativos. Como enzima unida a membrana y también soluble, con isoformas específicas de tejido, **ACHE** se estudia con frecuencia en modelos de fisiología sináptica, respuesta a tóxicos y comunicación cruzada de la señalización colinérgica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AChE (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACHE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACHE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACHE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AChE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACHE para la investigación de la señalización de AChE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACHE críticos para la función de AChE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACHE para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AChE CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AChE CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACHE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AChE (h) y el plásmido HDR AChE (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACHE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACHE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.