ACADVL (VLCAD) CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418939

Übersicht

Acadvl kodiert die Dehydrogenase für sehr langkettige Acyl‑CoA‑Substrate (ACADVL/VLCAD), ein mitochondriales Flavoprotein, das den ersten Dehydrogenierungsschritt der β‑Oxidation langkettiger Fettsäure‑Acyl‑CoAs katalysiert. Diese Aktivität speist Reduktionsäquivalente in das Elektronentransfer‑Flavoprotein(ETF)-System ein und unterstützt die oxidative Energiegewinnung, insbesondere in Geweben mit hohem mitochondrialem Bedarf wie Herz, Skelettmuskel und Leber. Eine Störung von ACADVL beeinträchtigt den Lipidabbau, fördert die Anreicherung langkettiger Acylcarnitine und verschiebt den Zellstoffwechsel in Richtung kompensatorischer Glukosenutzung und Stressantworten. Als zentrales Enzym der Fettsäureoxidation und der mitochondrialen Homöostase wird Acadvl in Modellen metabolischer Inflexibilität, mitochondrialer Dysfunktion und lipidvermittelter Zelltoxizität, die für die Forschung zu angeborenen Stoffwechselstörungen relevant sind, umfassend untersucht.

Das ACADVL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acadvl-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acadvl-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acadvl nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACADVL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acadvl-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACADVL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acadvl-Exone abzielen, die für die ACADVL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acadvl-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACADVL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACADVL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acadvl-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACADVL HDR-Plasmid (m) und ACADVL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acadvl-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acadvl-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.