ABC1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-418929-ACT

Das Mausgen **Abca1** kodiert den ATP-bindenden Cassettentransporter **ABC1**, einen zentralen Regulator des zellulären Effluxes von Cholesterin und Phospholipiden auf Apolipoproteine und unterstützt damit die Biogenese von naszentem HDL sowie die Lipidhomöostase. Die ABC1-Aktivität ist in LXR/RXR-gesteuerte Transkriptionsprogramme eingebettet und überschneidet sich mit der Lipidverarbeitung in Makrophagen, Membranremodellierung und inflammatorischer Signalgebung. Eine fehlregulierte **Abca1**-Expression oder -Funktion stört den Cholesterintransport, fördert die Bildung von Schaumzellen und wird umfassend im Kontext atheroskleroserelevanter Signalwege und Lipidspeicher-Phänotypen untersucht. In Mausmodellen dient **Abca1** zudem zur Untersuchung lipidabhängiger Effekte auf die Immunzellfunktion, den hepatischen Lipidstoffwechsel und neuroinflammatorische Prozesse, die mit dem Cholesterintransport verknüpft sind.

ABC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Abca1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Abca1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Abca1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Abca1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Abca1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.