AANAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418927

Übersicht

Das murine Gen *Aanat* codiert die Arylalkylamin‑N‑Acetyltransferase (AANAT), ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym der Melatoninbiosynthese, das in der Zirbeldrüse und anderen Geweben die N‑Acetylierung von Serotonin zu N‑Acetylserotonin katalysiert. Die AANAT‑Aktivität wird durch zirkadiane Signale eng reguliert – über cAMP/PKA‑Signalwege, phosphorylierungsabhängige Stabilisierung und koordinierte transkriptionelle Kontrolle – und verknüpft so den zellulären Stoffwechsel mit der Synchronisation an den Hell‑Dunkel‑Zyklus. Durch die Modulation von Melatonin und verwandten Indolamin‑Zwischenprodukten beeinflusst *Aanat* die Schlaf‑Wach‑Regulation, saisonale Physiologie und neuroendokrine Signalübertragung. Eine fehlregulierte AANAT‑Expression oder ‑Aktivität wurde in experimentellen Systemen mit Störungen des zirkadianen Rhythmus sowie veränderten Stress‑, Stimmungs‑ und Stoffwechselphänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ansatzpunkt für pfadorientierte Studien macht.

Das AANAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aanat-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aanat-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aanat nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AANAT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aanat-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AANAT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aanat-Exone abzielen, die für die AANAT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aanat-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AANAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AANAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aanat-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AANAT HDR-Plasmid (m) und AANAT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aanat-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aanat-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.