5330417C22Rik Plasmide Double Nickase (m): sc-432895-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 5330417C22Rik Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 5330417C22Rik Double Nickase Plasmid (m) e il 5330417C22Rik Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira 5330417C22Rik. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
5330417C22Rik Plasmide Double Nickase (m) | sc-432895-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino 5330417C22Rik codifica una proteina scarsamente caratterizzata, con annotazioni funzionali limitate, ed è comunemente studiato come open reading frame/trascritto non caratterizzato in screening genomici su larga scala e in dataset dello sviluppo. Le evidenze disponibili suggeriscono che possa contribuire all’omeostasi cellulare di base attraverso ruoli ancora da definire nella regolazione genica o in processi associati all’RNA, come inferito da profili di espressione e reti di co-espressione. Poiché la sua funzione molecolare e la collocazione in specifiche vie biologiche restano irrisolte, 5330417C22Rik è spesso oggetto di studio per collegare relazioni genotipo-fenotipo e per assegnare una funzione a nuovi loci. Studi di perturbazione possono aiutare a chiarire possibili legami con la biologia tessuto-specifica e con fenotipi rilevanti per la malattia in modelli murini, senza presupporre un ruolo clinico.
5330417C22Rik Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus 5330417C22Rik nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di 5330417C22Rik. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di 5330417C22Rik. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con 5330417C22Rik interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.