κ-casein Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406821

Descripción general

CSN3 codifica la κ-caseína, una fosfoproteína secretada caracterizada clásicamente como componente de las micelas de caseína de la leche, donde contribuye a la solubilidad de las proteínas y a la organización del fosfato cálcico. Como glucoproteína extracelular, la κ-caseína sufre modificaciones postraduccionales que influyen en las interacciones proteína–proteína y en la dinámica de secreción, lo que la convierte en un sustrato modelo para estudiar el procesamiento en la vía secretora y la escisión proteolítica. Aunque la biología de CSN3 está mejor definida en contextos relacionados con la lactancia, la variación en la secuencia y la glicosilación de la κ-caseína se ha asociado con cambios en la estabilidad proteica y en la generación de péptidos bioactivos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del procesamiento y la señalización de proteínas extracelulares. En sistemas humanos, CSN3 sirve como un locus manejable para investigar la regulación de la expresión de proteínas secretadas y los efectos posteriores de los péptidos derivados de la proteólisis sobre las respuestas celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO κ-casein (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CSN3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CSN3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CSN3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína κ-casein.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CSN3 para la investigación de la señalización de κ-casein, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CSN3 críticos para la función de κ-casein
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CSN3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido κ-casein CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido κ-casein CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CSN3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR κ-casein (h) y el plásmido HDR κ-casein (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CSN3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CSN3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.