γB-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402939

Descripción general

CRYGB codifica la γB-cristalina, una proteína estructural soluble y muy abundante del cristalino de los ojos de vertebrados, que contribuye al índice de refracción y a la transparencia del cristalino a largo plazo. La γB-cristalina participa en el ensamblaje de la red de cristalinas y en procesos de homeostasis proteica que mantienen la integridad de las células de las fibras del cristalino, donde el empaquetamiento compacto y la estabilidad son esenciales para minimizar la dispersión de la luz. La alteración de la estabilidad de las cristalinas o una mayor susceptibilidad a la agregación se asocia con fenotipos de opacificación del cristalino, lo que convierte a CRYGB en un locus relevante para estudiar los mecanismos de mal plegamiento proteico y proteostasis en tejidos oculares diferenciados. Dado que las células de las fibras del cristalino son en gran medida posmitóticas, CRYGB también proporciona un modelo para investigar cómo responden las proteínas de larga vida a lo largo del tiempo al estrés oxidativo y ambiental.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CRYGB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CRYGB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CRYGB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína γB-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CRYGB para la investigación de la señalización de γB-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CRYGB críticos para la función de γB-crystallin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CRYGB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CRYGB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR γB-crystallin (h) y el plásmido HDR γB-crystallin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CRYGB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CRYGB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.