γB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402939

概要

CRYGBはγB-クリスタリンをコードしており、γB-クリスタリンは脊椎動物の眼の水晶体に非常に豊富に存在する可溶性の構造タンパク質で、屈折率および水晶体の長期的な透明性に寄与します。γB-クリスタリンは、光散乱を最小限に抑えるために緻密な充填と安定性が不可欠な水晶体線維細胞の完全性を維持するうえで、クリスタリンネットワークの構築やタンパク質恒常性（プロテオスタシス）に関わる過程に関与します。クリスタリンの安定性の破綻や凝集しやすさの増大は水晶体混濁の表現型と関連しているため、CRYGBは分化した眼組織におけるタンパク質ミスフォールディングとプロテオスタシスの機構を研究する上で重要な遺伝子座です。さらに、水晶体線維細胞は概して非分裂性（ポストミトティック）であることから、CRYGBは長寿命タンパク質が酸化ストレスや環境ストレスに時間とともにどのように応答するかを調べるモデルにもなります。

γB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCRYGB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CRYGB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CRYGBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γB-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γB-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CRYGB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γB-crystallinの機能に不可欠なCRYGBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CRYGBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびγB-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CRYGB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γB-crystallin HDRプラスミド（h）および γB-crystallin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCRYGBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCRYGB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。