δ-casein Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419849

Descripción general

Csn1s2b codifica la δ-caseína, una proteína secretada de la leche que se expresa en la glándula mamaria y contribuye a la estructura de las micelas de caseína y a la unión de calcio/fosfato durante la lactancia. Como parte del clúster de genes de caseína, su transcripción está estrictamente regulada a lo largo del embarazo y la lactancia por la señalización prolactina/JAK2–STAT5 y otras vías sensibles a hormonas que coordinan la síntesis y secreción de proteínas lácteas. Los patrones alterados de expresión de caseínas se utilizan como indicadores de la diferenciación del epitelio mamario y de la competencia lactogénica, y los genes de la familia de las caseínas se monitorizan con frecuencia en estudios del desarrollo de la glándula mamaria y de respuestas al estrés. En modelos murinos, la perturbación de componentes de la caseína puede aportar información sobre los mecanismos que determinan la composición de la leche, la nutrición neonatal y fenotipos relacionados con la lactancia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO δ-casein (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Csn1s2b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Csn1s2b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Csn1s2b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína δ-casein.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Csn1s2b para la investigación de la señalización de δ-casein, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Csn1s2b críticos para la función de δ-casein
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Csn1s2b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido δ-casein CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido δ-casein CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Csn1s2b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR δ-casein (m) y el plásmido HDR δ-casein (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Csn1s2b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Csn1s2b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.