Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-TrCP (h): sc-400971

Présentation

BTRC code pour la protéine à boîte F β‑TrCP, une sous-unité de reconnaissance des substrats du complexe ligase E3 d’ubiquitine SCF (SKP1–CUL1–F‑box), qui cible des motifs degron phosphorylés afin de les ubiquitinyler et de les diriger vers la dégradation protéasomale. β‑TrCP régule plusieurs axes de signalisation, notamment la voie NF‑κB via le renouvellement d’IκB, la voie Wnt/β‑caténine par la dégradation de la β‑caténine, ainsi que le contrôle du cycle cellulaire en modulant des protéines telles que CDC25A et EMI1. Par ces voies, BTRC influence la prolifération, les réponses inflammatoires, l’adaptation aux dommages de l’ADN et les programmes épithélio‑mésenchymateux. Une activité dérégulée de β‑TrCP a été associée à une activation aberrante de ces voies et à une instabilité génomique dans divers contextes de recherche sur le cancer et l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β-TrCP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BTRC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BTRC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BTRC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β-TrCP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BTRC pour l'étude de la signalisation de β-TrCP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BTRC essentiels à la fonction de β-TrCP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BTRC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β-TrCP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β-TrCP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BTRC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β-TrCP plasmide HDR (h) et le β-TrCP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BTRC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BTRC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.