βPAK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422108

Descripción general

Pak3 codifica βPAK (quinasa 3 activada por p21), una quinasa de serina/treonina activada aguas abajo de las GTPasas de la familia Rho RAC1 y CDC42. βPAK coordina la remodelación del citoesqueleto de actina, el crecimiento de neuritas y la señalización sináptica mediante vías que convergen con la señalización MAPK/ERK, la dinámica de adhesión celular y la plasticidad neuronal dependiente de la actividad. En el ratón, la función de Pak3 es especialmente relevante para estudios del desarrollo del sistema nervioso y del funcionamiento de los circuitos, donde una señalización PAK alterada puede afectar la morfología de las espinas dendríticas y la conectividad sináptica. La desregulación de la señalización de la familia PAK se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y cognitivos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la señalización neuronal y del control del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO βPAK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pak3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pak3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pak3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína βPAK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pak3 para la investigación de la señalización de βPAK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pak3 críticos para la función de βPAK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pak3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido βPAK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido βPAK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pak3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR βPAK (m) y el plásmido HDR βPAK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pak3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pak3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.