Plásmido CRISPR de Activación (h) β-casein: sc-402248-ACT

CSN2 codifica la β-caseína humana, una proteína principal de la leche sintetizada por células epiteliales mamarias diferenciadas y utilizada habitualmente como indicador de diferenciación lactogénica. La expresión de β-caseína está regulada por señales endocrinas y de citocinas, integrando la activación de prolactina–JAK2/STAT5 con las vías de glucocorticoides e insulina para coordinar programas transcripcionales durante el desarrollo de la glándula mamaria. En sistemas modelo, CSN2 sirve como marcador funcional de activación secretora y maduración epitelial, vinculando el estado de la cromatina y el uso de potenciadores (enhancers) con la expresión génica específica de linaje. La desregulación de estas redes asociadas a la diferenciación es relevante para estudios de la plasticidad del epitelio mamario, las respuestas al estrés y el control transcripcional alterado observado en la biología de enfermedades mamarias.

β-casein El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-casein El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-casein. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-casein en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-casein en células tumorales con expresión de CSN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.