βB2-crystallin Double Nickaseプラスミド (h): sc-403626-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- βB2-crystallin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- βB2-crystallinダブルニカースプラスミド（h）およびβB2-crystallinダブルニカースプラスミド（h2）は、CRYBB2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: βB2-crystallin 抗体 (B-12): sc-376006
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
βB2-crystallin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
βB2-crystallin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB2はヒトβB2クリスタリンをコードしており、βB2クリスタリンは眼の水晶体における主要な構造タンパク質として、水晶体線維細胞の構築と長期的な透明性を支えています。β/γクリスタリンスーパーファミリーの一員として、βB2クリスタリンは高密度なタンパク質充填と屈折特性に寄与するとともに、酸化ストレスや加齢に伴うストレス下での凝集を抑えるシャペロン様相互作用を通じて、プロテオスタシスの維持にも関与します。CRYBB2の発現変化やタンパク質の不安定化は、水晶体の恒常性破綻や白内障関連表現型と関連しており、タンパク質安定性、ストレス応答、水晶体分化プログラムを研究するための有用なモデルとなります。さらにβB2クリスタリンは、眼組織および非眼組織の細胞環境において、保存されたクリスタリンネットワークが酸化還元バランスの崩れやプロテオトキシックストレスにどのように応答するかを調べる上でも扱いやすい系を提供します。
βB2-crystallin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CRYBB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CRYBB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CRYBB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CRYBB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。