β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424741

Übersicht

B3gnt2 kodiert β3Gn-T2, eine im Golgi lokalisierte β1,3‑N‑Acetylglucosaminyltransferase, die Poly‑N‑Acetyllactosamin‑Ketten auf N‑ und O‑Glykanen sowie Glycosphingolipiden verlängert. Durch die Steuerung von Verzweigung und Elongation von Glykanen beeinflusst β3Gn‑T2 lektinvermittelte Erkennungsereignisse, einschließlich der Galectin‑Bindung, was sich auf Zelladhäsion, Migration und die Organisation von Rezeptoren an der Plasmamembran auswirken kann. Eine B3gnt2‑abhängige Glykosylierung trägt zur Regulation von Immun‑ und Entzündungssignalen bei und moduliert in mehreren Geweben die Zusammensetzung der Glykokalyx. Eine veränderte Expression oder Aktivität von Enzymen der β3Gn‑T‑Familie wurde in der Literatur mit dysregulierten Zell‑Zell‑Interaktionen sowie Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Tumorbiologie und Immunstörungen relevant sind, was mechanistische Studien in Mausmodellen unterstützt.

Das β3Gn-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des B3gnt2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des B3gnt2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von B3gnt2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β3Gn-T2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von B3gnt2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β3Gn-T2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf B3gnt2-Exone abzielen, die für die β3Gn-T2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere B3gnt2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β3Gn-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom β3Gn-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des B3gnt2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β3Gn-T2 HDR-Plasmid (m) und β3Gn-T2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von B3gnt2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten B3gnt2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.