Plasmide CRISPR/Cas9 KO α_1D-AR (m): sc-419022

Présentation

Adra1d code le récepteur adrénergique α1D murin (α1D-AR), un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui se couple principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, la production de phosphates d’inositol, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et l’activation de la PKC. Par ces voies, α1D-AR influence la contraction du muscle lisse, le tonus vasculaire et celui des voies urinaires, ainsi qu’une régulation autonome plus large, avec des effets en aval sur la signalisation MAPK/ERK et des programmes transcriptionnels. L’expression d’Adra1d et la dynamique de sa signalisation sont fréquemment étudiées dans le contexte de la réactivité adrénergique spécifique aux tissus et de la contribution des sous-types de récepteurs au maintien de l’homéostasie physiologique. Une signalisation RCPG adrénergique dérégulée a été associée à des phénotypes cardiométaboliques et neurocomportementaux dans des modèles précliniques, faisant d’Adra1d une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies sensibles au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α1D-AR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adra1d dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adra1d, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adra1d à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α1D-AR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adra1d pour l'étude de la signalisation de α1D-AR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adra1d essentiels à la fonction de α1D-AR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adra1d pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α1D-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α1D-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adra1d. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α1D-AR plasmide HDR (m) et le α1D-AR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adra1d pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adra1d définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.