α-S1-casein Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419847

Descripción general

Csn1s1 codifica la α‑S1‑caseína de ratón, una importante fosfoproteína secretada de la leche que es sintetizada por células epiteliales mamarias diferenciadas y empaquetada para su exportación a través de la vía secretora RE–Golgi. Como componente central de las micelas de caseína, la α‑S1‑caseína contribuye al ensamblaje micelar y al manejo de calcio/fosfato, favoreciendo una entrega eficiente de nutrientes durante la lactancia. La expresión de Csn1s1 está fuertemente regulada por hormonas lactogénicas y por programas transcripcionales posteriores dependientes de JAK2/STAT5 y sensibles a la prolactina, que coordinan la diferenciación de la glándula mamaria. La regulación alterada de los genes de caseína se utiliza como indicador del estado de las células epiteliales mamarias, de las respuestas de estrés secretor y de fenotipos asociados a la lactancia relevantes para modelos de investigación en biología mamaria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-S1-casein (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Csn1s1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Csn1s1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Csn1s1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-S1-casein.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Csn1s1 para la investigación de la señalización de α-S1-casein, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Csn1s1 críticos para la función de α-S1-casein
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Csn1s1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-S1-casein CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α-S1-casein CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Csn1s1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-S1-casein (m) y el plásmido HDR α-S1-casein (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Csn1s1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Csn1s1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.