αENaC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422825

Übersicht

Scnn1a kodiert die Alpha‑Untereinheit des epithelialen Natriumkanals (αENaC), eine geschwindigkeitsbestimmende Komponente der amiloridempfindlichen Na⁺‑Aufnahme über apikale Membranen in Atemwegen, Niere und anderen Epithelien. αENaC lagert sich mit den β‑ und γ‑Untereinheiten zusammen und steuert so den transepithelialen Natriumtransport, wodurch die Homöostase der Flüssigkeit auf der Atemwegsoberfläche und die renale Natriumbilanz beeinflusst werden. Die Kanalaktivität wird durch proteolytische Aktivierung und ubiquitinabhängigen Turnover reguliert, wobei insbesondere die durch Nedd4‑2 vermittelte Endozytose sowie hormonelle Signale, die die Natriumhandhabung feinabstimmen, eine zentrale Rolle spielen. Eine Fehlregulation des ENaC‑abhängigen Ionentransports wird in Mausmodellen häufig als mechanistischer Rahmen genutzt, um Störungen des epithelialen Flüssigkeitshaushalts, Dehydrierung von Schleim und salzsensitive Physiologie zu untersuchen.

Das αENaC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scnn1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scnn1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scnn1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die αENaC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scnn1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der αENaC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scnn1a-Exone abzielen, die für die αENaC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scnn1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom αENaC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom αENaC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scnn1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das αENaC HDR-Plasmid (m) und αENaC HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scnn1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scnn1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.