Plasmide CRISPR/Cas9 KO αENaC (m): sc-422825

Présentation

Scnn1a code la sous-unité alpha du canal sodique épithélial (αENaC), un composant limitant de l’absorption de Na⁺ sensible à l’amiloride à travers les membranes apicales des voies aériennes, du rein et d’autres épithéliums. αENaC s’assemble avec les sous-unités β et γ pour contrôler le transport transépithélial du sodium, influençant ainsi l’homéostasie du liquide de surface des voies aériennes et l’équilibre sodé rénal. L’activité du canal est régulée par une activation protéolytique et un renouvellement dépendant de l’ubiquitine, impliquant notamment l’endocytose médiée par Nedd4-2 et des signaux hormonaux qui ajustent la gestion du sodium. La dérégulation du transport ionique dépendant d’ENaC est largement utilisée comme cadre mécanistique pour étudier, dans des modèles murins, les déséquilibres hydriques épithéliaux, la déshydratation du mucus et la physiologie sensible au sel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO αENaC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scnn1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scnn1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scnn1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine αENaC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scnn1a pour l'étude de la signalisation de αENaC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Scnn1a essentiels à la fonction de αENaC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scnn1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le αENaC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le αENaC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scnn1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le αENaC plasmide HDR (m) et le αENaC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scnn1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scnn1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.