α-actinin-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401186-NIC

ACTN2はα-アクチニン2をコードしており、α-アクチニン2はカルシウム非感受性のアクチン架橋タンパク質で、横紋筋のZディスクやコスタメアに豊富に局在します。そこでアクチンフィラメントを係留し、サルコメア構造の構築・維持に関与します。α-アクチニン2は、チチン、インテグリン、イオンチャネル、シグナル伝達アダプターなどとの相互作用を介して、メカノトランスダクション、細胞骨格のリモデリング、ならびに収縮活動を細胞応答へ結び付ける力伝達経路に寄与します。ACTN2の機能異常は遺伝性心筋症や筋原線維の構造破綻と関連づけられており、心筋細胞および骨格筋筋線維における構造安定性とストレス応答シグナルを研究する上で重要な結節点となります。研究用途としては、Zディスクタンパク質ネットワークの解析、サルコメア組立の動態解明、ヒト筋疾患モデルにおける遺伝子型—表現型の関連解析などが一般的です。

α-actinin-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACTN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACTN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACTN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACTN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。