Plasmide CRISPR/Cas9 KO αA-crystallin (m): sc-419820

Présentation

Cryaa code l’αA-cristalline, une petite protéine de choc thermique très abondante dans le cristallin oculaire, qui agit comme chaperon moléculaire indépendant de l’ATP afin de maintenir la solubilité des cristallines et d’empêcher l’agrégation des protéines en situation de stress. Au-delà de son rôle structural dans l’établissement de la transparence du cristallin et de ses propriétés réfractives, l’αA-cristalline contribue à la protéostasie en interagissant avec des protéines clientes mal repliées et en modulant des réseaux de réponse au stress liés à l’équilibre redox et à l’apoptose. Une expression ou une fonction altérée de CRYAA est associée à un dysfonctionnement des cellules fibreuses du cristallin, à une perturbation de l’homéostasie protéique et à des phénotypes liés à la cataracte, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude du développement du cristallin et des processus d’agrégation protéique liés à l’âge. Dans les modèles murins, la perturbation de Cryaa permet des études mécanistiques sur l’activité chaperonne, l’organisation du cytosquelette et la résistance au stress dans les cellules épithéliales et fibreuses du cristallin.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO αA-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cryaa dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cryaa, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cryaa à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine αA-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cryaa pour l'étude de la signalisation de αA-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cryaa essentiels à la fonction de αA-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cryaa pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le αA-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le αA-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cryaa. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le αA-crystallin plasmide HDR (m) et le αA-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cryaa pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cryaa définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.