H2-Bl アクチベーター

一般的なH2-Bl活性化剤には、フォルスコリンCAS 66575-29-9、IBMX CAS 28822-58-4、PMA CAS 16561-29-8、A23187 CAS 52665-69-7、およびSpectinomycin dihydrochloride pentahydrate CAS 22189-32-8が含まれるが、これらに限定されない。

H2-Bl活性化剤は、様々なシグナル伝達経路に影響を与えることによってH2-Blの活性を増強する化合物群である。フォルスコリン、IBMX、イソプロテレノール、ロリプラムはすべて、細胞内のcAMPレベルを上昇させることによって機能し、それによってPKAを活性化し、リン酸化イベントを通じてH2-Blの活性を高めると考えられる。PKC活性化因子としてのPMAと、細胞内カルシウムを増加させるA23187は、どちらもキナーゼを活性化する可能性があり、もしH2-BlがPKCやカルシウム依存性のシグナル伝達経路に関与していれば、H2-Blをリン酸化して活性を増強する可能性がある。さらに、IBMXがcAMPの分解を防ぐ役割を果たすことは、持続的なPKAの活性化をサポートし、このキナーゼの作用によってH2-Bl活性が増強される可能性をさらに示唆している。H2-Blの活性は、一酸化窒素とカルシウムのシグナル伝達を調節する化合物によってさらに影響を受ける。SNAPとL-アルギニンはともにNOの産生に寄与し、これはcGMPレベルの上昇とPKGの活性化につながり、もしcGMP依存性経路によって制御されていれば、H2-Bl活性を増強する可能性がある。イオノマイシンの細胞内カルシウムを増加させる能力は、カルシウム依存性タンパク質と経路を活性化し、H2-Bl活性の増強につながる可能性がある。

HTSによって潜在的なH2-Bl活性化因子が同定された後は、その特異性と直接的な作用機序を確認するために、様々な二次的アッセイを用いてバリデーションが行われる。これらのアッセイには、化合物がH2-Blタンパク質産物と相互作用することを証明するための直接結合試験が含まれることもある。表面プラズモン共鳴（SPR）や等温滴定カロリメトリー（ITC）のような技術は、潜在的な活性化剤とH2-Blタンパク質との相互作用の親和性や速度論を測定するために採用されうる。直接的な相互作用が確立されれば、共免疫沈降法などのさらなる研究を用いて、相互作用の生理学的関連性を検証することができる。