ZNF74 Plasmide Double Nickase (h): sc-411084-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZNF74 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZNF74 Double Nickase Plasmid (h) e il ZNF74 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZNF74. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZNF74 Antibody (B-11): sc-390612
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZNF74 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411084-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZNF74 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411084-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZNF74 codifica una proteina umana a dita di zinco di tipo KRAB, implicata nel legame al DNA in modo sequenza-specifico e nella repressione trascrizionale, supportando una regolazione dell’espressione genica dipendente dalla cromatina. È stata studiata nel contesto dell’organizzazione nucleare e dei programmi di controllo trascrizionale che modellano l’identità cellulare e le risposte allo stress. La variabilità genomica e l’alterata espressione di ZNF74 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e dello sviluppo, in linea con ruoli in reti regolatorie sensibili al dosaggio e allo stato epigenetico. Queste caratteristiche rendono ZNF74 un bersaglio utile per indagare i meccanismi di repressione trascrizionale e il rimodellamento delle vie a valle in modelli cellulari umani.
ZNF74 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZNF74 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZNF74. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZNF74. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZNF74 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.