Plásmido CRISPR de Activación (h) ZKSCAN3: sc-416370-ACT

ZKSCAN3 (dedo de zinc con dominios KRAB y SCAN 3) es un factor de transcripción nuclear que se une al ADN e integra interacciones proteicas mediadas por SCAN con la regulación transcripcional dependiente de KRAB. Modula programas de expresión génica vinculados a la proliferación y diferenciación celular, así como a las respuestas al estrés celular, y se ha implicado en la regulación de vías asociadas a la autofagia y los lisosomas. Se han descrito alteraciones en la actividad de ZKSCAN3 en múltiples contextos patológicos, incluidos diversos tipos de cáncer, donde redes transcripcionales desreguladas contribuyen al crecimiento invasivo y a la adaptación metabólica. Como nodo de control transcripcional, ZKSCAN3 es una diana útil para analizar señales reguladoras upstream y firmas génicas downstream relevantes para la biología oncogénica y de respuesta al estrés.

ZKSCAN3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZKSCAN3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZKSCAN3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZKSCAN3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZKSCAN3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZKSCAN3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZKSCAN3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZKSCAN3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZKSCAN3 en células tumorales con expresión de ZKSCAN3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.