ZCCHC6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418151

Panoramica

ZCCHC6 (nota anche come TUT7) codifica una terminale uridililtransferasi contenente un dominio a dito di zinco di tipo CCHC, che catalizza l’uridilazione al 3′ di diversi substrati di RNA, influenzandone la stabilità e la degradazione. È un effettore chiave della regolazione genica post-trascrizionale, agendo su miRNA precursori e maturi e partecipando a vie che accoppiano l’aggiunta di code all’RNA al turnover exonucleolitico. ZCCHC6 è stata collegata alla regolazione dei trascrittomi dell’immunità innata e della risposta allo stress tramite la modulazione del processamento e della sorveglianza dell’RNA. Un’uridilazione dell’RNA deregolata e un’alterata attività di ZCCHC6 sono state associate a perturbazioni dell’omeostasi dei miRNA e di programmi di espressione genica rilevanti per il cancro e per fenotipi infiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZCCHC6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZCCHC6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZCCHC6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZCCHC6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZCCHC6 per lo studio della segnalazione di ZCCHC6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZCCHC6 critici per la funzione di ZCCHC6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZCCHC6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZCCHC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZCCHC6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZCCHC6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZCCHC6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZCCHC6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZCCHC6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZCCHC6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.