ZBP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425482-LAC

Il gene murino **Zbp1** codifica **ZBP1** (Z-DNA binding protein 1), un sensore citosolico di acidi nucleici che riconosce acidi nucleici in conformazione Z e collega segnali associati a patogeni e a danno all’attivazione dell’immunità innata. ZBP1 attiva una segnalazione dipendente da RHIM con RIPK1/RIPK3 per regolare programmi trascrizionali infiammatori e vie di morte cellulare programmata, inclusa la necroptosi, e si integra con risposte guidate dagli interferoni. Attraverso questi meccanismi, ZBP1 influenza la restrizione antivirale e l’equilibrio tra sopravvivenza cellulare e morte infiammatoria, processi rilevanti per la biologia delle infezioni e l’immunopatologia. Una segnalazione di ZBP1 deregolata è stata implicata in infiammazione aberrante e in un controllo alterato della morte cellulare, rendendolo un nodo utile per dissezionare i circuiti dell’immunità innata in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale ZBP1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Zbp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ZBP1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Zbp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ZBP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Zbp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.