XRCC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401784-ACT

XRCC1 (X-ray repair cross-complementing protein 1) ist ein Gerüstprotein, das die Basenexzisionsreparatur (BER) und die Reparatur von Einzelstrangbrüchen (SSBR) koordiniert, indem es Reparaturfaktoren an DNA-Schadensstellen zusammenführt. Es interagiert mit PARP1, DNA-Polymerase β und DNA-Ligase III, um die Endverarbeitung und Ligation zu erleichtern und dadurch die Genomstabilität bei Replikationsstress und oxidativen Schäden aufrechtzuerhalten. Die Funktion von XRCC1 ist in Signalwege der DNA-Schadensantwort sowie in Chromatin-Remodeling-Prozesse eingebettet, die die Mutationsakkumulation und das Zellüberleben nach genotoxischen Einwirkungen beeinflussen. Eine veränderte XRCC1-Aktivität oder genetische Variation wurde mit unterschiedlicher DNA-Reparaturkapazität und Anfälligkeitsphänotypen bei Krebserkrankungen und neurologischen Störungen in Verbindung gebracht, was XRCC1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen der Genomerhaltung macht.

XRCC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen XRCC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

XRCC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des XRCC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der XRCC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen XRCC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native XRCC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von XRCC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des XRCC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem XRCC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.