Particules Lentivirales d'Activation (h) WT1: sc-400095-LAC

WT1 (Wilms tumor 1) code un facteur de transcription à doigts de zinc qui régule, de manière dépendante du contexte, des programmes impliqués dans le développement, la différenciation et les décisions de destin cellulaire, notamment les transitions mésenchymo-épithéliales et l’homéostasie tissulaire. WT1 module des réseaux géniques impliqués dans l’apoptose, la prolifération et le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine, avec des interactions rapportées avec des voies telles que la signalisation WNT/β-caténine, TGF-β/SMAD et MAPK. En biologie humaine, l’activité de WT1 est étroitement liée au développement rénal et gonadique, et elle est fréquemment étudiée en hématopoïèse et en biologie tumorale en raison d’une expression dérégulée dans de multiples états transcriptionnels associés aux cancers. Ces propriétés font de WT1 un nœud utile pour étudier la spécification de lignage, les circuits de facteurs de transcription et des programmes régulateurs pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales WT1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de WT1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales WT1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription WT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de WT1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif WT1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.