Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
WT1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400095-LAC
- Specie Target: human
- 200 µl di Particelle Lentivirali di Attivazione CRISPR/dCas9 ad alto titolo
- WT1 Le particelle lentivirali di attivazione (h) sono un mediatore di attivazione sinergica (SAM) un sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente ed efficientemente l'espressione genica attraverso la trasduzione delle cellule
- WT1 Lentiviral Activation Particles (h) contengono i seguenti elementi di Attivazione SAM : una nucleasi Cas9 (dCas9) deattivata (D10A and N863A) fusa al dominio di transattivazione VP64, una proteina di fusione MS2-p65-HSF1 ed un RNA guida target specifico di 20 nt Contengono anche geni per la resistenza alla blasticidina, igromicina and puromicina
- Il complesso SAM lega e una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- Gli gRNA codificati dal WT1 Plasmide di attivazione lentivirale (h) e dal WT1 Plasmide di attivazione lentivirale (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte del promotore WT1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WT1 Antibody (H-1): sc-393498
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WT1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h) | sc-400095-LAC | 200 µl | $455.00 |
WT1 (Wilms tumor 1) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che regola programmi dipendenti dal contesto nello sviluppo, nella differenziazione e nelle decisioni di destino cellulare, incluse le transizioni mesenchima-epitelio e l’omeostasi tissutale. WT1 modula reti geniche coinvolte in apoptosi, proliferazione e controllo trascrizionale associato alla cromatina, con interazioni riportate con vie di segnalazione quali WNT/β-catenina, TGF-β/SMAD e MAPK. Nella biologia umana, l’attività di WT1 è strettamente legata allo sviluppo renale e gonadico ed è spesso studiata in ematopoiesi e biologia dei tumori a causa dell’espressione deregolata in molteplici stati trascrizionali associati a neoplasie. Queste proprietà rendono WT1 un nodo utile per indagare la specificazione di linea, i circuiti dei fattori di trascrizione e programmi regolatori rilevanti per la malattia.
Le particelle di attivazione lentivirale WT1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di WT1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.
Le particelle di attivazione lentivirale WT1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione WT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di WT1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo WT1 e l'architettura regolatoria.
Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.