Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-2: sc-402665-ACT

Le gène humain **WNT2** code la protéine Wnt-2, un ligand glycoprotéique sécrété qui active la signalisation Wnt afin de réguler le développement embryonnaire, la mise en place des tissus et la communication stromal‑épithéliale chez l’adulte. Wnt-2 se lie principalement aux récepteurs Frizzled et aux corécepteurs LRP5/6 pour favoriser la stabilisation de la β‑caténine et déclencher des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation et les décisions de destinée cellulaire. Elle interagit également, selon le contexte, avec des voies Wnt non canoniques qui influencent la dynamique du cytosquelette et la migration. Une expression dérégulée de **WNT2** et des altérations de l’activité de la voie ont été associées à des anomalies de morphogenèse et à des modifications des signaux du microenvironnement pertinentes pour des processus oncogéniques et le remodelage fibrotique, ce qui en fait un nœud de voie d’intérêt dans des modèles de maladies.

Wnt-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.